Høyytelses væskekromatografi inkluderer hovedsakelig injeksjonssystem, infusjonssystem, separasjonssystem, deteksjonssystem og databehandlingssystem. Følgende vil introdusere deres respektive komposisjoner og egenskaper.
1. Injeksjonssystemet bruker vanligvis en diafragmainjektor eller et høytrykksinjeksjonskammer for å fullføre injeksjonsoperasjonen, med et konstant injeksjonsvolum. Dette er gunstig for å forbedre reproduserbarheten av prøveanalyse.
2. Infusjonssystemet består av tre deler: en høytrykkspumpe, et mobilfasereservoar og en gradientmåler. Det generelle trykket til en høytrykkspumpe er l. 47-4.4X107Pa, justerbar og stabil strømningshastighet. Når høytrykks mobilfase passerer gjennom den kromatografiske kolonnen, kan det redusere diffusjonseffekten av prøven inne i kolonnen, akselerere bevegelseshastigheten inne i kolonnen, forbedre separasjonsgraden og gjenvinne prøven. Fordelaktig for å opprettholde den biologiske aktiviteten til prøven. Den mobile faselagringsfeil- og gradientanalysatoren kan endre den mobile fasen i henhold til egenskapene til den stasjonære fasen og prøven, inkludert endring av polariteten, ionestyrken og pH-verdien til elueringsmidlet, eller bruk av konkurrerende inhibitorer eller denatureringsmidler. Dette muliggjør effektiv separasjon av flere stoffer, selv om det bare er ett sett med forskjeller eller isomerer.
3. Separasjonssystemet inkluderer kromatografikolonner, koblingsrør, termostater osv. Lengden på den kromatografiske kolonnen er vanligvis 10-50cm (hvis to er nødvendig, kan et koblingsrør legges mellom dem), med en indre diameter på 2-5mm, laget av høykvalitets rustfritt stål eller tykkvegget glassrør eller titanlegering. Det er en fast fase med en partikkelstørrelse på 5-10 μm (sammensatt av en matrise og et fiksativ). Matrisen i den stasjonære fasen er laget av harpiks eller silikagel med høy mekanisk styrke, som har inerthet (som alkalisk silikagel er fjernet), porøsitet (porestørrelse opp til 1000?) og stort spesifikt overflateareal. De er mekanisk belagt for kobling (ligner på fremstilling av gasskromatografistasjonære faser), eller kjemisk koblet med forskjellige gener (som fosfat, kvaternær amino, hydroksymetyl, fenyl, amino eller forskjellige lengder av karbonkjedealkyl) eller ligandorganiske forbindelser . Så denne faste relative strukturen har god selektivitet. For eksempel, etter kobling av erteagglutinin (PSA) på overflaten av porøs silikagel, kan glykoproteiner i fibroblaster isoleres. I tillegg er det stasjonære fasebaserte plasmidet lite og kolonnesjiktet er lett å oppnå en jevn og tett tilstand. Det er lett å redusere virvelstrømdiffusjonseffekten. Matrikspartikkelstørrelsen er liten, mikroporene er grunne, og masseoverføringen av prøven i det mikroporøse området er kort. Disse er fordelaktige for å redusere båndbredde og forbedre oppløsningen. I henhold til kolonneeffektteorianalysen, jo mindre matrisepartikkelstørrelse og større teoretisk antall N på platen. Dette beviser videre at jo mindre matrisepartikkelstørrelsen er, desto høyere separasjonsgrad. I tillegg kan høyytelses væskekromatografitermostater justere temperaturen fra romtemperatur til 60 grader, forkorte analysetiden ved å øke masseoverføringshastigheten., Det kan forbedre effektiviteten til den kromatografiske kolonnen.
4. De vanligste detektorene for HPLC-deteksjonssystemer inkluderer ultrafiolettdetektorer, brytningsindeksdetektorer og fluorescensdetektorer.
(1) UV-detektoren er egnet for å detektere prøver med absorpsjonsegenskaper under ultrafiolett (eller synlig) lys. Dens egenskaper: bredt bruksområde (som proteiner, nukleinsyrer, aminosyrer, nukleotider, peptider, hormoner, etc.); Høy følsomhet (deteksjonsgrense på 10-10g/ml); Bredt lineært område; Ikke følsom for endringer i temperatur og strømningshastighet; Kan påvise prøver eluert med gradientløsninger.
(2) Differensiell brytningsindeksdetektor kan brukes til å detektere alle prøvekomponenter med brytningsindekser forskjellig fra de som oppdages av mobilfasedetektor. For tiden påvises de fleste karbohydratforbindelser ved hjelp av dette deteksjonssystemet. Systemet har sterk universalitet og enkel betjening, men lav følsomhet (deteksjonsgrense på 10-7g/ml), og endringer i mobilfasen kan forårsake endringer i brytningsindeksen. Derfor er den verken egnet for sporanalyse eller for påvisning av gradientelueringsprøver.
(3) Fluorescensdetektoren er kun egnet for bestemmelse av fluorescerende organiske forbindelser (som polysykliske aromatiske hydrokarboner, aminosyrer, aminer, vitaminer og visse proteiner) under visse forhold, basert på fluorescensintensiteten og konsentrasjonen av det utsendte lyset. Dens følsomhet er svært høy (deteksjonsgrensen er 10-12~10-14g/ml), og den kan brukes til sporanalyse og deteksjon i gradientelueringsarbeid.
5. Databehandlingssystemet kan samle inn, lagre, vise, skrive ut og behandle testdata for å skille prøver, og kan utføre forberedelses- eller identifiseringsarbeid på riktig måte